METODO DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACION RITCHIE

FUNDAMENTO: Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol u éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.

Unas ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usan cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

MATERIAL Y EQUIPO

Centrifuga                                                                       soluc. Salina isotónica

Tubos de ensaye cónicos de 15 ml                                soluc. De formaldehido al 10%  

Gasa cortada en cuadros                                               éter

Embudos de polietileno

Vasos de precipitados de 50 ml

Aplicadores de madera

Pipetas Pasteur con bulbo

Portaobjetos de 26X76 mm

Cubreobjetos de 22X22 mm     

Microscopio

METODO

1.- Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1gr. De la materia fecal en el vaso de precipitado, se añaden 10ml de solución salina y se homogeniza.

2.- Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado con el tubo cónico.

3.- Se centrifuga la suspensión durante 2 min a 2000 rpm.

4.- Se decanta el sobrenadante y se suspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y re suspendiendo 2 veces más.

5.- Al último sedimento se agregan 10ml de solución de formaldehído al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10min.

6.- Se añaden después 5ml de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos

7.- Se centrifuga durante 2 min a 2000 rpm

8.- Después de centrifugar se observan 4 capas:

  Ø  Éter en la superficial

  Ø  Un tapón de restos fecales

  Ø  Formaldehido

  Ø  Sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.

9.- Se decanta el sobrenadante

10.- Se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos

11.- Se le añade una gota de lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos, se homogeniza, cubriéndolo con el mismo.

12.- Se observa la preparación en el microscopio con objetivos de 10X y 40X.

  

Resultado: En nuestro frotis encontramos quistes de Entamoeba Coli.