METODO
DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACION RITCHIE
FUNDAMENTO: Se basa en la concentración de
los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda
de formol u éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.
Unas ventajas
que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias,
permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de
ser examinada, se usan cuando se necesita una técnica para evaluación de
tratamiento y determinación de frecuencia.
MATERIAL Y EQUIPO
Centrifuga soluc. Salina isotónica
Tubos
de ensaye cónicos de 15 ml soluc. De formaldehido al 10%
Gasa
cortada en cuadros éter
Embudos
de polietileno
Vasos
de precipitados de 50 ml
Aplicadores
de madera
Pipetas
Pasteur con bulbo
Portaobjetos
de 26X76 mm
Cubreobjetos
de 22X22 mm
Microscopio
METODO
1.- Con
el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1gr. De la materia fecal en el
vaso de precipitado, se añaden 10ml de solución salina y se homogeniza.
2.-
Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo
el filtrado con el tubo cónico.
3.-
Se centrifuga la suspensión durante 2 min a 2000 rpm.
4.- Se decanta el sobrenadante y se suspende el
sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y re suspendiendo 2
veces más.
5.-
Al último sedimento se agregan 10ml de solución de formaldehído al 10%, se
mezcla y se deja reposar durante 10min.
6.- Se añaden después 5ml de éter, se tapan los
tubos con tapones de caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos
7.-
Se centrifuga durante 2 min a 2000 rpm
8.-
Después de centrifugar se observan 4 capas:
Ø Éter en la superficial
Ø Un tapón de restos fecales
Ø Formaldehido
Ø Sedimento en el fondo del
tubo, conteniendo los elementos parasitarios.
9.-
Se decanta el sobrenadante
10.-
Se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una
gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos
11.-
Se le añade una gota de lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos, se
homogeniza, cubriéndolo con el mismo.
12.-
Se observa la preparación en el microscopio con objetivos de 10X y 40X.
Resultado:
En nuestro frotis encontramos quistes de Entamoeba Coli.
